油体是由单层磷脂膜包裹液态的三酰甘油(TAG)组合而成，它是植物中储存油脂的一种亚细胞结构[1]，且存在于几乎所有积累油的植物组织中。油体密度相较于其它细胞结构最小，因而能够浮于水溶液表层，易于分离[2]，其可为种子的萌发和幼苗的早期生长发育提供能量，也可临时存储同化产物参与碳源的分配[3]。因其类似于天然脂质的作用，油体在食品、药物和工业产品等行业中应用广泛，其乳化剂的性质也使得油体在疫苗、化妆品和个人护理产品等方面具有一定的应用[4]。此外，在油体中表达具有较高营养功效的外源蛋白或多肽还可以提高种子的营养成分、改善种子的食用品质、增加植物的附加值[5]。目前，关于植物种子中油体提取的研究已有相关报道。例如，采用水提法可以从大豆中提取稳定的油体[6]；采用Tris-HCl法提取出来的亚麻芥种子油体大小均一且稳定[7]；杨晶等[8]采用PBS作为提取缓冲液，通过去除蛋白质可以得到更加纯净的红花油体；玉米胚芽采用水萃取提取油体并在初始提取液中应用超滤技术可防止油体聚结，从而提高油体提取率并保持其自然完整性[9]。由此可见，不同植物提取种子中油体的适宜方法并不相同，因此研究不同植物的油体提取方法十分必要。

牡丹是我国的传统名花，它不仅具有较高的观赏和药用价值，还是近些年新兴的木本油料作物。牡丹种子富含脂肪酸，其中α-亚麻酸因为人体必备的脂肪酸而备受人们的关注[10]。

目前，关于牡丹籽油的研究主要集中于籽油的提取工艺和精炼技术[10]、脂肪酸成分及理化特性[11]、牡丹籽油的功效[12]等方面。油体作为植物储存脂质的亚细胞器颗粒，它的正常发育是脂肪酸储存和积累的前提[13]，相反，脂肪酸的含量与组成也影响着油体的化学与物理性质[14]。油桐油体与脂肪酸的研究就表明其脂肪酸含量与油体发育关系密切[15]。关于牡丹脂肪酸的储存，尤其是油体方面的研究一直鲜见报道。本研究采用分级法[16]和优化法[17]对牡丹油体进行提取与比较，在获得相对较好提取方法的基础之上，对所提取油体在不同温度、pH、NaCl浓度、糖浓度等条件下的稳定性进行研究，从而对牡丹油体的性质进行了解，便于充分利用牡丹籽油中各类脂肪酸的功能、特性，挖掘牡丹油体在不同领域的应用需求价值。

1 材料与方法

1.1 材料

以栽植于扬州大学牡丹芍药种质资源圃中的‘凤丹’为材料，采集花后120天的‘凤丹’种子用于油体的提取。

1.2 主要仪器与设备

5810R高速台式冷冻离心机；IX83荧光显微镜；CFX96荧光定量PCR仪；60D数码相机。

1.3 方法

1.3.1 油体的提取

分别采用分级法[16]和优化法[17]提取牡丹种子中的油体。

分级法：称取大小适中、色泽一致的种子5 g浸泡5 h后用解剖针除去种皮种胚，在种子中加入20 mL研磨液(0.6 mol/L蔗糖，10 mmol/L pH=7.5的磷酸钠缓冲液)并于4 ℃冰上研磨成匀浆离心，在上层加入20 mL漂浮液Ⅰ(0.4 mol/L蔗糖，10 mmol/L pH=7.5的磷酸钠缓冲液)，离心后取上层油层加入20 mL去污清洗液(0.1% Tween-20 0.2 mol/L蔗糖，5 mmol/L pH=7.5的磷酸钠缓冲液)再次离心，在所得上层中加入20 mL磷酸钠缓液，离心并收集上层油层于离心管中，加入离子洗脱液(2 mol/L氯化钠，0.6 mol/L蔗糖，10 mmol/L pH=7.5的磷酸钠缓冲液)20 mL后于上层加入漂浮液Ⅱ(2 mol/L氯化钠，0.25 mol/L蔗糖，10 mmol/L pH= 7.5的磷酸钠缓冲液)20 mL后离心。收集油层重悬于20 mL尿素，室温震荡后加入20 mL 磷酸钠缓冲液，离心后收集油层于研磨液中加入己烷混匀，再次离心后去掉上层己烷油层重悬于20 mL研磨液，上层加入20 mL漂浮液离心，最终收集油层于10 mL离心管中备用。

优化法：取新鲜种子5 g，加6倍去离子水胶体磨均，过滤取出上清液4 ℃，10 000 r/min离心30 min。取上浮物溶于5倍加入0.5 mol/L NaCl和0.4 mol/L蔗糖的pH=7.0的Tris-HCl 0.05 mol/L溶液中搅拌过胶体磨20 min后离心。取上浮物加入5倍去离子水，再加入0.1% tween20充分混合，静置后离心。取上浮物加入2倍己烷混匀后离心，上层油体分离冷藏4 ℃备用。

1.3.2 油体提取方法的比较分析

对采用上述方法提取的油体外观、提取率、显微结构、4 ℃条件下储存两周的稳定性和油体蛋白组成进行观察和检测，从而筛选出相对较好的提取方法。

油体提取率=提取油体的质量/种子的质量×100%

油体显微结构的观察:取少量油体，加蒸馏水稀释后滴在载玻片上，盖好盖玻片，放置在荧光显微镜(IX83，奥林巴斯株式会社)下采用40倍物镜观察其显微结构并拍照。

文章来源：《牡丹》 网址: http://www.mdzzs.cn/qikandaodu/2021/0415/1697.html