牡丹(Paeonia suffruticosa Andr.)属毛茛科芍药属灌木，为传统名贵观赏花卉，又有富贵花和“花中之王”的美称。其根皮，又称牡丹皮、丹皮，为传统中药，《神农本草经》列为中品，具有清热凉血、活血化瘀之功效[1]。牡丹花作为特色的天然生物资源，在我国有悠久的药用和食用历史，《四川中药志》载牡丹花性平、苦、淡，具有调经活血的功能[2]。牡丹花是较好的天然营养保健资源，凤丹牡丹(Paeonia suffruticosa Andr. cv. Fengdan) 花2013年被国家卫计委批准为新食品原料[3]。前期研究中，我们对凤丹牡丹花的化学成分进行了系统的分离，并从中得到7个单萜糖苷类化合物、9个黄酮类化合物和2个没食子酸类化合物[4-5]。

鞣质(tannins)又称单宁，是存在于植物体内一类结构比较复杂的多元酚类化合物。鞣质广泛存在于植物界，其多元酚类结构赋予它一系列独特的化学性质，并具有很强的生物和药理活性，固涩收敛滑脱、遏制气血津液耗散的药物都含有丰富的鞣质成分。现代研究表明，鞣质具有抗氧化[6]、抗肿瘤[7-8]、抑菌[9]、抗病毒[10]以及免疫调节[11-12]的药理活性。我们在前期研究的基础上，采用高效液相色谱制备的方法，大大减少了鞣质的损失。结果得到2个没食子酸鞣质类化合物，分别为1-O-galloyl-β-D-glucose(1)和1, 2, 3, 4, 6-trigalloyl-β-D-glucose(2)。同时得到1个黄酮类化合物kaempferol-3,7-di-O-β-D-glucopyranoside(3)。化合物1～3(结构式见图1)均为首次从凤丹牡丹花中分离得到，也是首次从凤丹牡丹花中分离得到鞣质类化合物。

图1 化合物1～3结构式Fig.1 Structures of compounds 1～3

1 仪器与材料

Varian INOVA-600型核磁共振波谱仪(美国Varian公司，以TMS为内标)；Varian INOVA-400型核磁共振波谱仪(美国Varian公司，以TMS为内标)；Agilent 1120 型高效液相色谱仪(配有DAD检测器，自动进样器，美国Agilent 公司)；R201 型旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)；RIGOL L-3140型高效液相色谱仪(北京普源精电科技有限公司，色谱柱为YMC-PACK ODS-A column，250 mm×10 mm)；Agilent 5973型质谱仪(美国Agilent公司)；FA1104 型电子天平(上海精天电子仪器厂)。

乙醇(分析纯，德州恒业化工有限公司)；甲醇、石油醚，分析纯(天津市化学试剂厂)；甲酸、乙腈(色谱纯，山东禹王试剂有限公司)。

牡丹花采自山东菏泽，经山东省分析测试中心刘伟副研究员鉴定为芍药属植物凤丹牡丹的花。

2 提取与分离

取干燥后的凤丹牡丹花瓣10 g，粉碎后于65%乙醇中60 ℃温浸3次，每次4 h，合并提取液，减压浓缩至无醇味。浸膏0.3 g分散于甲醇中(20 mL)成悬浊液，用石油醚萃取3次(3 ×20 mL)，甲醇部分蒸干复溶后直接采用高效液相色谱制备，得化合物1(1.2 mg)、2(2.0 mg)和3(5.0 mg)。

2.1 制备条件

采用RIGOL L-3140型高效液相色谱仪，色谱柱为YMC-PACK ODS-A(250 mm×10 mm，5 μm)，以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相，梯度洗脱：0～5 min，5%乙腈；5～8 min，5%～12%乙腈；8～23 min，12%乙腈；23～24 min，12%～15%乙腈；24～30 min，15%乙腈；30～31 min，15%～21%乙腈；31～48 min，21%乙腈；48～53 min，21%～34%乙腈；53～63 min，34%乙腈；63～64 min，34%～100%乙腈；64～69 min，100%乙腈；体积流量3.0 mL/min；进样量60 μL，检测波长270 nm。色谱图见图2。

图2 样品制备高效液相色谱图Fig.2 Chromatogram of the crude methanol extract by HPLC

2.2 化合物纯度检测

纯度检测梯度条件同上，采用Agilent 1120 型高效液相色谱仪，色谱柱为纳微Nano-Micro C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，体积流量1.0 mL/min；进样量10 μL，检测波长270 nm，化合物纯度均大于95%。色谱图见图3。

图3 单体化合物高效液相色谱图Fig.3 HPLC chromatograms of compound 1～3

3 结构鉴定

化合物1：无色粉末。ESI-MS m/z: 333 [M + H]+。1H NMR (DMSO, 600 MHz): δH7.00 (2H, s, H-2, 6), 5.50 (1H, d, J = 8.0 Hz, Glc-1′), 3.14～3.67 (6H, m, Glc-2′-6′); 13C NMR (DMSO, 150 MHz):δC 119.18 (C-1), 109.47 (C-2, 6), 146.09 (C-3, 5), 139.48 (C-4), 94.89 (Glc-1), 73.04 (Glc-2), 78.29 (Glc-3), 69.96 (Glc-4), 77.03(Glc-5), 61.02(Glc-6)。以上数据与文献[13]报道对照基本一致，故鉴定化合物为1-O-galloyl-β-D-glucose。

化合物2：无色粉末。ESI-MS m/z: 941 [M + H]+。 1H NMR (DMSO, 400 MHz):δH 6.37 (1H, d, J = 8.2 Hz, Glc-1), 5.95 (1H, t, J = 9.6 Hz, Glc-3), 5.46 (2H, m,Glc-1-2,4), 4.59 (1H, d, J = 9.6 Hz, Glc-5), 4.32 (2H, brs, Glc-6); 13C NMR (DMSO, 150MHz): δC92.16 (Glc-1), 71.01 (Glc-2), 72.38 (Glc-3), 68.17 (Glc-4), 72.57 (Glc-5),61.86 (Glc-6), 117.73(G1-1),109.51 (G1-2, 6),146.18 (G1-3, 5),140.25 (G1-4),164.44 (G1-7), 118.52(G3-1),109.19(G3-2, 6), 145.88 (G3-3, 5),139.45 (G3-4), 165.93 (G3-7),118.35(G2-1), 109.37(G2-2, 6), 145.96 (G2-3, 5),139.69 (G2-4), 165.29 (G2-7), 118.50(G4-1),109.27(G4-2, 6),146.00 (G4-3, 5), 139.66 (G4-4),165.07 (G4-7),119.33(G6-1),109.24(G6-2, 6), 146.06 (G6-3, 5), 139.31 (G6-4), 164.94 (G6-7)。以上数据与文献[14]报道对照基本一致，故鉴定化合物为1,2,3,4,6-Trigalloyl-β-D-glucose。

文章来源：《牡丹》 网址: http://www.mdzzs.cn/qikandaodu/2020/0904/799.html